1.雙抗體夾心法測抗原

    一種借助酶免疫或放射免疫法檢測抗原的技術。即以已知抗體包被固相載體，相繼加入待測抗原和酶(或核素)標記的抗體，從而形成三明治樣雙抗體夾心。

雙抗體夾心法是檢測抗原（臨床檢測蛋白質等大分子抗原）zui常用的方法，操作步驟如下：

1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。

2）加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。

3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。

4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。

2.間接法測抗體

    間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（抗抗體）以檢測與固相抗原結合的受檢抗體，故稱為間接法。本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。操作步驟如下：

1）將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。

2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3）加酶標抗抗體。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。

4）加底物顯色。

3.競爭法測抗體

    當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。

4.競爭法測抗原

    小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（酶標板）；

（2）酶標記的抗原或抗體（酶結合物）；

（3）底物；

（4）陰性對照品和陽性校準品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）抗體及標本的稀釋液；

（6）洗滌液；

（7）反應終止液。

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