ELISA試劑盒批發我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優化抗體的量。記住，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

檢測試劑要適量
     另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。

洗滌很關鍵
      洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果ELISA試劑盒實驗背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。

      常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會降低特異結合，產生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協助洗滌過程中的封閉。

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