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    犬瘟熱病毒(CDV)ELISA檢測試劑盒實驗代測服務說明
    點擊次數:1074 更新時間:2017-03-10

    肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒檢測原理

    犬瘟熱病毒(CDV)ELISA檢測試劑盒試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被犬瘟熱病毒(CDV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬瘟熱病毒(CDV)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判斷樣品是否含有犬瘟熱病毒(CDV)。

    樣品收集、處理及保存方法

    1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

    2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

    3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

    5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    自備物品

    酶標儀(450nm)
    高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    37℃恒溫箱

    操作注意事項

    試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
    實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
    預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。
    嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
    所有液體組分使用前充分搖勻。

    肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒試劑的準備

     20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

      手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
      自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    犬瘟熱病毒(CDV)ELISA檢測試劑盒操作步驟

      從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
      設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;
      待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
      隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
      每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
      每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

    結果判斷

    1.試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

    陰性對照孔OD值平均值≤0.2。

    2.臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.2

    3.陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

    4.陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

    試劑盒性能

    1.準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效。

    2.特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

    3.重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

    4.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

    5.有效期:6個月

    免責聲明

    1.犬瘟熱病毒(CDV)ELISA檢測試劑盒試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

    2.嚴格按照肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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