細(xì)胞簡(jiǎn)介：

主動(dòng)脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動(dòng)脈之間，抑制射入主動(dòng)脈的血液回流入左心室。主動(dòng)脈瓣鈣化可引起主動(dòng)脈瓣狹窄關(guān)閉不全等，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動(dòng)脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。

細(xì)胞特性：

1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常主動(dòng)脈組織。

2）細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形、不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 間質(zhì) 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

動(dòng)物細(xì)胞/組織甘露糖6-磷酸異構(gòu)酶（mannose－6－phosphate isomerase；MPI）電泳分析試劑盒

體液尿酸含量直接（TPTZ）比色法定量檢測(cè)試劑盒

人Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠B細(xì)胞κ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

小鼠球蛋白G2α(IgG2α)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞BMK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

人補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠單胺氧化酶(MAO)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠載脂蛋白H(APOH)elisa檢測(cè)試劑盒

真核啟動(dòng)因子2α抗體(eIFα2)抗體 EIF2S1

指甲髕骨綜合征相關(guān)蛋白NPS1抗體 LMX1b

鈣調(diào)節(jié)蛋白-1重組兔單克隆抗體 Calponin-1

肝臟X受體兔單克隆抗體 LXR alpha

I型膠原蛋白/膠原蛋白1/1型膠原蛋白/I型膠原a1抗體 Collagen I

KIAA1970蛋白抗體 KIAA1970

親環(huán)蛋白（親環(huán)素）PPIB抗體 Cyclophilin B

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體 SMC4

ATP6蛋白抗體 MT-ATP6

BHLHE41抗體 BHLHE41

跨膜蛋白Smoothened抗體 SMO

類泛素蛋白1單克隆抗體 SUMO1

ZMYND17蛋白抗體 ZMYND17

β-抑制蛋白1/2抗體 beta-arrestin 1 + 2

細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體 CKAP2

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶調(diào)節(jié)亞基2抗體 CKS2

小鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)elisa檢測(cè)試劑盒

黑色素瘤相關(guān)抗原8抗體

MAGEA8

14號(hào)染色體開放閱讀框94抗體

兔主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞C14orf94/HAUS4