實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

毛囊作為一種重要的皮膚附屬器官，為顯著的特點是始終處于生長期、退行期和休止期的周期性循環(huán)中。在毛囊的形態(tài)學(xué)和周期性循環(huán)中，毛囊的角質(zhì)細胞作為一種特殊類型的角質(zhì)形成細胞，受毛細胞分泌的一些細胞因子或信號因子等作用，迅速發(fā)生分化增殖或凋亡，進而誘導(dǎo)毛囊進入生長期或退行期。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常皮膚組織。

2)細胞鑒定：廣譜角蛋白(PCK)熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 角質(zhì)形成 細 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

S-100BELISAKit

大鼠肥大細胞類elisa分析檢測試劑盒

Rat Mast Cell Chymase ELISA Kit

山羊黃體生成素(LH)elisa分析檢測試劑盒

LHELISAKIT

細胞單胺氧化酶（MAO）總活性比色法定量檢測試劑盒

人DAB2互作蛋白(DAB2IP)elisa檢測試劑盒

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa分析檢測試劑盒

小鼠前列腺素G/H合酶1(PTGS1)elisa檢測試劑盒

β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa分析檢測試劑盒

β-EP ELISA Kit

人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP-4)elisa分析檢測試劑盒

HumanLRP-4ELISAKit

細胞脯羥化酶（prolil hydroxylase）活性比色法定量檢測試劑盒

人高分子量脂聯(lián)素(HMW Adiponectin)elisa分析檢測試劑盒

大鼠歸巢關(guān)聯(lián)細胞黏附分子(HCAM)elisa檢測試劑盒

亞硝酸還原酶（NiR）測試盒

肌微管素相關(guān)蛋白3抗體

MTMR3

FAM123C蛋白抗體

FAM123C

金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）  Anti-TIMP-1(CT)

核酮糖1,5二磷酸羧化酶抗體  Anti-RUBISCO

類固醇受體激活蛋白3抗體  Anti-NCOA3/KAT13B/AIB1/SRC-3

肺表面活性蛋白D抗體  Anti-SP-D/PSPD

Cy3標(biāo)記的兔抗人IgM

囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體

Involucrin

7號染色體開放閱讀框62抗體

兔毛囊角質(zhì)細胞C7orf62

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。