實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

肝卵原細胞是肝臟中一種具有強大增值能力和分化潛能的干細胞，在肝臟發(fā)生損傷和缺失后，肝臟之所以有強大的再生和修復(fù)能力是肝臟中干細胞發(fā)揮作用。在肝臟受到嚴(yán)重急性損傷時，肝卵圓細胞被活化，可以分化為肝實質(zhì)細胞和肝內(nèi)膽管上皮等多種功能性細胞，修復(fù)肝臟的損傷。肝卵圓有肝內(nèi)和肝外兩個來源。此外肝卵圓細胞與原發(fā)性肝癌的發(fā)生也有著密切的關(guān)系，對肝卵圓細胞的研究在多個方面都有著重要的意義。

細胞特性：

1）組織來源于處理后大鼠的肝組織。

2)細胞鑒定：c-kit或AFP熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：多角形細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代肝卵圓細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠胰腺再生蛋白Iα(REG1α)檢測試劑盒 ，英文名： REG1α ELISA Kit

Mouse endotoxin (ET) ELISA Kit 小鼠內(nèi)毒素(ET)檢測試劑盒

MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAkit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanD-Dimer,D2DELISAKit人D二聚體

細胞AMPK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPPAR-α大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α

NA重組甲型流感 H9N2 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

pre-X protein(CT 0.5mgpre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FGF7 Protein Human 重組人 FGF7 / FGF-7 / KGF 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白

pre-X protein(CT 0.5mgpre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)

FGF7 Protein Human 重組人 FGF7 / FGF-7 / KGF 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NA重組甲型流感 H9N2 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠膽囊收縮素8(CCK-8)檢測試劑盒

Rat thrombin receptor () ELISA Kit 大鼠受體()檢測試劑盒

HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKIT 人N端前腦素(-proBNP)檢測試劑盒 進口分裝

HumanAialNaiureticPeptide,ANP檢測試劑盒人心肽(ANP)檢測試劑盒

植物源性食品羽扇豆(lupine)試劑盒20次

Humahrombopoietin，TPOELISAKit人血小板生成素(TPO)檢測試劑盒

兔肝卵圓細胞微量二（MDA）測定試劑盒（TBA法）

總合成酶（NOS）測試盒[測總NOS（T－NOS）]

C（抗壞血酸）（VitaminC）測定試劑盒（比色法）

酯酶（CHE）測定試劑盒（比色法）

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。