細(xì)胞簡(jiǎn)介：

膀胱是一個(gè)儲(chǔ)尿器官 ,它是由平滑肌組成的一個(gè)囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開(kāi)口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。

膀胱壁分為三層：即漿膜層、肌肉層和粘膜層。膀胱上皮細(xì)胞主要出于粘膜層，是極薄的一層移行上皮組織，和輸尿管及尿道粘膜彼此連貫。粘膜在三角區(qū)由于緊密地和下層肌肉連合，所以非常光滑，但在其他區(qū)域則具有顯著的皺襞，在膀胱充盈時(shí)，皺襞即消失。粘膜層有腺組織，特別是在膀胱頸部及三角區(qū)。

由于尿路移形上皮會(huì)脫落，隨尿液一起排出，因此獲取相對(duì)比較容易，是泌尿組織工程的種子細(xì)胞。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于人正常膀胱組織。

2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代上皮細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠α2-HS糖蛋白(AHSG)elisa分析檢測(cè)試劑盒

肉類（folic acid）含量比色法定量檢測(cè)試劑盒

小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞MYC蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒

冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS）測(cè)試盒

總微型RNA（miRNA）電泳法分離試劑盒

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)elisa分析檢測(cè)試劑盒

突觸結(jié)合蛋白10抗體 Synaptotagmin X

微管蛋白特定伴侶蛋白E抗體 TBCE

RTCD1蛋白抗體 RTCD1

SH3YL1蛋白抗體 SH3YL1

8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框K29抗體 C8orfK29

AF647標(biāo)記的P選擇素糖蛋白配體1抗體 PSGL-1/CD162, Alexa Fluor 647

鉀離子通道蛋白家族成員4抗體 KCNE4

角蛋白相關(guān)蛋白KAP3.3抗體 KAP3.3

乙酰化化組蛋白H2B (Lys12)鼠單克隆抗體 Histone H2B (Acetyl K12)

硬脂酰A去飽和酶5抗體 SCD5

二氫乳清酸脫氫酶抗體 DHODH

防御素α4抗體 Neutrophil defensin 4

GRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 GRAMD2

G蛋白偶聯(lián)受體19/GPCR GPR4抗體 GPR19/GPR4

囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC20 抗體 BNIP1

盤狀結(jié)構(gòu)域受體蛋白2單克隆抗體 DDR2/CD167b

動(dòng)物乳腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒

胰島細(xì)胞自身抗原1抗體

ICA1

細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體

人膀胱上皮細(xì)胞AFF4