本公司代理ATCC細(xì)胞，提供Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸售前售后一條龍服務(wù)，若要獲取詳細(xì)的說明書或價(jià)格信息，點(diǎn)擊了解更多腫瘤細(xì)胞。
細(xì)胞名稱  Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；2ug/ml Puromycin

傳代方法 1:2~1:4傳代；每周2~3次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FB飥#

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸在運(yùn)輸?shù)倪^程中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，因此客戶在收到貨以后的*時(shí)間是要先觀察產(chǎn)品的狀況，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要立即打開培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱過夜，并于次日在顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)?jiān)囍门_(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理；如若證實(shí)細(xì)胞無活力，請(qǐng)?jiān)谑盏截浐?8小時(shí)內(nèi)將細(xì)胞狀態(tài)反饋給我公司，我們將盡快幫助解決。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng)：
1.收到Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)絡(luò)。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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250克Azide Dextrose Broth疊氮鈉葡萄糖肉湯

100克KF Streptococcus AgarKF鏈球菌瓊脂

250克EVA BrothEVA肉湯

250克LIM Medium賴氨酸吲哚動(dòng)力培養(yǎng)基

250克BETA-SSA AgarBETA-SSA瓊脂

250克Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)

250克V-P Medium Modified改良V-P培養(yǎng)基

250克R-2A AgarR2A瓊脂

TEM7R/Plxdc2  腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體   規(guī)格 0.2ml*

TEM1/CD248  內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗體   規(guī)格 0.2ml*

Telomerase Binding Protein, P23  端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體   規(guī)格 0.1ml*

TEF4/TEA domain family member 2  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體   規(guī)格 0.2ml*

TEF3/TEAD4  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體   規(guī)格 0.2ml*

TECTB  遺傳性耳聾β-tectorin抗體   規(guī)格 0.2ml*

TdT/DNTT  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體   規(guī)格 0.2ml*

TDRD9/HIG1  缺氧誘導(dǎo)蛋白HIG1抗體   規(guī)格 0.2ml*

TDP-43  Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗體   規(guī)格 0.1ml*

TCTP  翻譯控制腫瘤蛋白抗體   規(guī)格 0.1ml*

TCRG  T細(xì)胞受體γ抗體   規(guī)格 0.2ml*

TCN2/Transcobalamin II  轉(zhuǎn)鈷胺素蛋白2抗體   規(guī)格 0.2ml*
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-549運(yùn)輸Mouse Anti-rabbit IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.3ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.5ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.3ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*