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    產(chǎn)品中心Products 當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 科研細(xì)胞 > 細(xì)胞系 > 產(chǎn)品詳情

    產(chǎn)品名稱:W6/32細(xì)胞,小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商

    產(chǎn)品特點(diǎn):W6/32細(xì)胞,小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:人分泌型免疫球蛋白A human secretory IgA 0.1ml
    胰島細(xì)胞自身抗原1抗體 ICA1 0.2ml
    胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白2抗體 Islet 2 0.2ml
    白介素-16抗體 IL-16 0.1ml
    離子鈣接頭蛋白抗體 AIF1 0.1ml
    Iroquois同源蛋白4抗體 IRX4 0.2ml
    干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋

    產(chǎn)品型號:

    更新日期:2021-03-29

    訪問次數(shù):635

    W6/32細(xì)胞,小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商的詳細(xì)資料:

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    運(yùn)輸和保存:
    視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
    1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
    2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

    產(chǎn)品名稱

    W6/32細(xì)胞,小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商

    英文名稱

    W6/32 cells, mouse B cell hybridoma cell

    貨號

    EY-X64177

    細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
    1.研究的對象是活細(xì)胞
    在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
    2.研究條件可以人為控制
    pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
    3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
    通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
    4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
    采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
    冷凍保存細(xì)胞之方法?
    冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
    冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
    培養(yǎng)操作:
    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
    3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
    4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
    3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
    1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

    JeKo-1(人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

    中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuiiMDA-MB-231(人腺細(xì)胞)

    SF126(人腦瘤細(xì)胞)苜蓿中華根瘤菌

    McCown Woody Plant Vit Mix(Modified)BR100毫升國產(chǎn)/進(jìn)口

    人肝氟耐藥株BEL/FU

    人尿道上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

    穗霉屬 Spicaria sp.大麗輪枝菌-北京病圃菌系 Verticillium Verticillium dahliea Kleb

    CCD-1095Sk(人腺浸潤性導(dǎo)管旁皮膚細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

    CNE1, 人鼻咽細(xì)胞系人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞

    Molt-4(人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion

    大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis

    W6/32細(xì)胞,小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商熒光素Cy7標(biāo)記大鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照)Rat IgG/Cy7 0.1ml

    Alexa Fluor 555標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對照)Rabbit IgG/Alexa Fluor 555 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記兔抗FITCRb Anti-FITC/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記羊抗人IgAGoat Anti-human IgA/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記親合素Avidin/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記小鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照)Mouse IgG/PE 0.1ml

    PE標(biāo)記蛋白AProtein A/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記羊IgG(細(xì)胞流式同型對照)Goat IgG/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記大鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照)Rat IgG/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記牛IgGBovine IgG/PE 0.1ml

    熒光素PE標(biāo)記牛IgMBovine IgM/PE 0.1ml

    實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
    一、分離與培養(yǎng)
    1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
    3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
     4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
     5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
    二、免疫熒光鑒定:
    1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
     2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
    3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
     4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
    5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
    6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

     

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