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    產(chǎn)品名稱:貓支原體LAMP試劑盒

    產(chǎn)品特點(diǎn):貓支原體LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:5-溴-2-吡:283.895- bromide -2-:223463-13-6 C5H3BrIN

    2-氯-6-三氟甲吡:181.542- -6- three:39890-95-4 C6H3ClF3N

    2,3-二氯吡:147.992,3- two:2402-77-9 C5H3Cl2N

    代萘:254.07Iodine naph

    產(chǎn)品型號(hào):50次

    更新日期:2021-02-20

    訪問(wèn)次數(shù):480

    50次貓支原體LAMP試劑盒的詳細(xì)資料:

    儲(chǔ)存條件:
    僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
    3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    參數(shù)規(guī)格:

    產(chǎn)品名稱

    貓支原體LAMP試劑盒

    英文名稱

     Lamp kit for Mycoplasma felis

    規(guī)格

    50次

    ?
    使用方法:
    一、樣品 DNA 的制備
    用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
    二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
    1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
    2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
    3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
    4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
    5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
    6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
    7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
    8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 
    檢測(cè)步驟:
    一、 試劑的準(zhǔn)備
    從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
    設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
    試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
    熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    總量 15 µL N×15µL
    1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
    7.2 qPCR反應(yīng)條件
    將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
    循環(huán)條件:
    1循環(huán) 50℃ for 2 min
    預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
    PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

    5-溴-2-吡:283.895- bromide -2-:223463-13-6 C5H3BrIN

    2-氯-6-三氟甲吡:181.542- -6- three:39890-95-4 C6H3ClF3N

    2,3-二氯吡:147.992,3- two:2402-77-9 C5H3Cl2N

    代萘:254.07Iodine naphthalene:90-14-2 C10H7I

    蘇木精Su Mujing:302.28 C16H14O6:517-28-2

    三尖杉寧堿Three - pointed:831.91C45H53NO14:71610-00-9

    1,5-萘二磺鈉1,5- naphthalene two sulfonic acid:332.25334 C10H6Na2O6S2:1655-29-4

    2-Boc-硫代-4,6-二甲嘧:240.322-Boc- -4,6- two:41840-28-2 C11H16N2O2S

    3-甲吡氧物:109.133- methyl pyridine oxide:1003-73-2 C6H7NO

    貓支原體LAMP試劑盒小鼠 Raf-1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    TUBG1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    GLB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    TIMD3 / TIM3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

    CNNM3 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

    CD30 / TNFRSF8 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

    CD16a / FCGR3A CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

    小鼠 BBS7 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    大鼠 PTBP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    CCNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    PKD1L2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

    重組人 IL5 / Interleukin 5 蛋白

     

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