產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產品英文名稱：Human GDF3 Protein

產品中文名稱：重組人生長分化因子 3（GDF3）

規格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8708
用途：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

標簽:無標簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源GDF 3(Q9NR23) (Ala251-Gly364)表達的蛋白片段。

蛋白長度：重組人 GDF 3 由 141 個氨基酸組成，預計分子質量為 13 kDa。

純度:> 96 % ，使用SDS-PAGE檢測

采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質中的 EU 含量小于 1.0。

產品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 150mM NaCl 20mM Tris , pH 8.0溶液。

基因ID:9573

使用中注意事項:開蓋使用前，動?動

背景

GDF-3（以前稱為 Vgr-2）是一種 TGF-beta 超家族成員，屬于生長/分化因子家族。因子家族的成員。GDF-3 在未分化的胚胎干（ES）細胞、白色脂肪組織和大腦中表達。366氨基酸（aa）的小鼠 GDF-3 含有 22 aa 的信號序列:、230 aa 的前肽和 114 aa 的成熟蛋白。含有一個潛在的 N-糖基化位點。成熟區包含一個半胱結結構，該結構在整個的半胱結結構。然而，它缺少負責形成分子間二硫鍵的第四個半胱，因此 GDF-3 可能存在一個 N.鍵，因此 GDF-3 可能以非共價的同源二聚體形式存在。成熟的人類 GDF-3 與小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83% 和 83% aa 的序列:相同性。小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83%、83% aa 的序列:相同性。大部分 GDF-3 以未水解的前體形式存在。未加工的前體和成熟的前體似乎都有活性:，但活性:可能有所不同。所有形式都能對抗 BMPs。在 ES 細胞中，抑制 BMP2 信號傳導的GDF-3 可維持多能性。GDF-3 還影響早期細胞命運的決定；例如，缺失小鼠 GDF-3會導致胃前期胚胎的前內臟內胚層出現缺陷。在胚胎發生過程中，GDF-3 與 GDF-1 相互合作。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

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