實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠肝動脈平滑肌分離自肝動脈組織；在胚胎期，肝臟有3條動脈供血，分別來源于胃左動脈、腹腔動脈和腸系膜上動脈，這3條動脈分別的不同部位。出生后，一般保留一條動脈，大部分為起源于腹腔動脈的動脈，由其分出左、右肝動脈供應(yīng)左、右半肝。偶爾也可見起源于胃左動脈的動脈或起源于腸系膜上動脈的動脈。但也有2條動脈并存的情況，如起源于腹腔動脈和起源于胃左動脈（25%），起源于腹腔動脈和起源于腸系臘上動脈（10%），而起源于胃左動脈和起源于腸系膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見。此外，還有5%像胚胎期一樣，3條動脈同時存在。這種起源于腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動脈的動脈供血時，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈，如果在常見肝動脈類型外，還有一支這種異位起始的動脈的一部分血流，這種肝動脈稱副肝動脈。肝動脈平滑肌細胞是肝動脈的重要結(jié)構(gòu)細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。肝動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關(guān)鍵因素，研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肝動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠肝動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠0酸二酯酶3A(PDE3A)檢測試劑盒 ，英文名： PDE3A ELISA Kit

Mouse hepatitis B virus surface aigen (HBsAg) ELISA Kit 小鼠乙型肝表面抗原(HBsAg)檢測試劑盒

Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGATA4MouseGATAbindingprotein4)ELISAKit小鼠GATA結(jié)合蛋白4

細胞過氧化物酶(GSHPX)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

Ratpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit大鼠交聯(lián)物(PY)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

SEMA4D重組食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

IL-10(Interleukin-10 0.5mgIL-10(Interleukin-10) 白介素10(白細胞介素-10)(抗原)

PDZD11重組人 PDZD11 / PDZK11 / PISP 蛋白 Protein

FABP7 Protein Human 重組人 BLBP / FABP7 蛋白

BCAM Protein Mouse 重組小鼠 BCAM 蛋白 (Fc 標簽)

IL-10(Interleukin-10 0.5mgIL-10(Interleukin-10) 白介素10(白細胞介素-10)(抗原)

FABP7 Protein Human 重組人 BLBP / FABP7 蛋白

SEMA4D重組食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

BCAM Protein Mouse 重組小鼠 BCAM 蛋白 (Fc 標簽)

PDZD11重組人 PDZD11 / PDZK11 / PISP 蛋白 Protein

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒

HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit 人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-presynapticmembraneaibody,PsmAb檢測試劑盒人抗突觸前膜抗體(PsmAb)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細胞染色體分離試劑盒20次

HumaumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit人特異生長因子/相關(guān)因子(TGSF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠肝動脈平滑肌細胞小鼠T細胞活化連接蛋白檢測試劑盒   小鼠T細胞活化連接蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠T細胞活化連接蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠T細胞活化連接蛋白試劑盒、小鼠T細胞活化連接蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠E選擇素檢測試劑盒   小鼠E選擇素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠E選擇素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠E選擇素試劑盒、小鼠E選擇素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠E鈣粘著蛋白檢測試劑盒   小鼠E鈣粘著蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠E鈣粘著蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠E鈣粘著蛋白試劑盒、小鼠E鈣粘著蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠D-乳酸脫氫酶檢測試劑盒   小鼠D-乳酸脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠D-乳酸脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠D-乳酸脫氫酶試劑盒、小鼠D-乳酸脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。