實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠腮腺分離自腮腺組織；腮腺是哺乳類(lèi)動(dòng)物口腔中位于下頜角處的最大唾液腺，位于外耳道的前下方，下頜后窩內(nèi)及下頜支的深面。腮腺也是某些無(wú)尾目動(dòng)物頸部有毒皮膚腺的聚集體；唾液腺有3對(duì)，腮腺、舌下腺和頜下腺，其中最大的一對(duì)是腮腺。腮腺細(xì)胞是高度分化的上皮源性細(xì)胞，是一種營(yíng)養(yǎng)需要復(fù)雜、在一般合成培養(yǎng)基中不易生長(zhǎng)，體外培養(yǎng)比較困難。目前，DMEM培養(yǎng)液被認(rèn)為較適于腺細(xì)胞的培養(yǎng)。加入一定量的血清更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖與分化。另外，接種的細(xì)胞密度也是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素之一，尤其是在腺細(xì)胞這種單層細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，接種的細(xì)胞總數(shù)量和生長(zhǎng)基質(zhì)表面的細(xì)胞密度對(duì)整個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)均有影響。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腮腺采用膠原酶-聯(lián)合消化后差速貼壁，結(jié)合上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腮腺經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： D1R ELISA Kit

Porcine heat shock protein 70 (HSP-70) ELISA Kit 豬熱休克蛋白70(HSP-70)檢測(cè)試劑盒

蟹特定基因序列(Cytb)核酸檢測(cè)試劑盒 48T

CLIAKitforLTD4(HumanleukoieneD4)ELISAKit人白三烯D4

體液總巰基含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitGH雞生長(zhǎng)因子

IL2重組大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene 0.5mgHCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨細(xì)胞病毒UL49抗原

IL17F重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 Protein

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ENPP7 Protein Mouse 重組小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白

HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene 0.5mgHCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨細(xì)胞病毒UL49抗原

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL2重組大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

ENPP7 Protein Mouse 重組小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白

IL17F重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 Protein

小鼠氧還原蛋白過(guò)氧化物酶2(PRDX2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human soluble fibrin monomer complex (SFMC) ELISA Kit 人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)檢測(cè)試劑盒

Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISAKit 人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor15-LO/LOX(Human15-lipoxygenase)ELISAKit人15脂加氧酶

飲料離子(Na)濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseLDL-ICELISAKit小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腮腺細(xì)胞小鼠脂聯(lián)素(mouse Adiponectin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠抗線(xiàn)粒體抗體(mouse AMA)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠抗核抗體(mouse ANA)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠血管緊張素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝