實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠子宮成纖維分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持，這些結構受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的子宮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。子宮成纖維細胞的主要特征：①是子宮的重要細胞組成，在體外易于培養；②在子宮損傷后能修復和重塑子宮；③在子宮炎癥時能有效控制炎癥擴散。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠子宮成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠子宮成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

小鼠膠原酶Ⅲ(CollagenaseⅢ)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素原(PCT)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素受體(C)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)試劑盒   96T/48T

小鼠0酸化細胞外信號調節激酶(pERK)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 大鼠結締組織生長因子(CTGF)試劑盒

Humanα-sarcomericactin,α-SCAELISAKit 人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAdenovirusAigen,ADV-Ag試劑盒人腺病毒抗原(ADV-Ag)試劑盒規格：96T/48T

直接細胞克隆兩步法逆轉錄PCR試劑盒100次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3,AFP-L3ELISAKit小鼠小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)試劑盒規格：96T/48T

SERPINA6重組小鼠 SerpinA6 / CBG 蛋白 Protein

ACE( ACE, testis-specific isoform precursor 0.5mgACE( ACE, testis-specific isoform precursor) 血管緊張素轉換酶(抗原)

FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

DAPK1 Protein Human 重組人 DAPK1 / DAP Kinase 1 蛋白 (aa 1-363, His & GST 標簽)

LAMP1 Protein Rat 重組大鼠 LAMP1 / CD107a 蛋白 (Fc 標簽)

ACE( ACE, testis-specific isoform precursor 0.5mgACE( ACE, testis-specific isoform precursor) 血管緊張素轉換酶(抗原)

DAPK1 Protein Human 重組人 DAPK1 / DAP Kinase 1 蛋白 (aa 1-363, His & GST 標簽)

SERPINA6重組小鼠 SerpinA6 / CBG 蛋白 Protein

LAMP1 Protein Rat 重組大鼠 LAMP1 / CD107a 蛋白 (Fc 標簽)

FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠子宮成纖維細胞大鼠載脂蛋白C1(APOC1)試劑盒 ，英文名： APOC1 ELISA Kit

Mouse phosphotylinosital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)試劑盒

MouseLeptin,LEPELISAkit 小鼠瘦素(LEP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfibromodulin,FMODELISAKit人纖調蛋白

細胞/組織高質化高爾基體分離試劑盒10次

ELISAKitMMP-5大鼠基質金屬蛋白酶5