實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人肝動脈內皮分離自肝動脈組織；在胚胎期，肝臟有3條動脈供血，分別來源于胃左動脈、腹腔動脈和腸系膜上動脈，這3條動脈分別的不同部位。出生后，一般保留一條動脈，大部分為起源于腹腔動脈的動脈，由其分出左、右肝動脈供應左、右半肝。偶爾也可見起源于胃左動脈的動脈或起源于腸系膜上動脈的動脈。但也有2條動脈并存的情況，如起源于腹腔動脈和起源于胃左動脈（25%），起源于腹腔動脈和起源于腸系臘上動脈（10%），而起源于胃左動脈和起源于腸系膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見。此外，還有5%像胚胎期一樣，3條動脈同時存在。這種起源于腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動脈的動脈供血時，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈，如果在常見肝動脈類型外，還有一支這種異位起始的動脈的一部分血流，這種肝動脈稱副肝動脈。肝動脈內皮細胞是襯于肝動脈內表面的單層扁平上皮，在炎癥時高表達黏附分子，與血流中白細胞表面黏附分子相互作用，從而介導白細胞穿越血管壁，亦屬一類非專職抗原提呈細胞。它們吞噬異物、細菌、壞死和衰老的組織，還參與集體免疫活動，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動脈硬化；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內皮細胞亦控制一些物質，如白血球進出血管。

方法簡介：

公司實驗室分離的人肝動脈內皮采用混合酶消化法結合差速貼壁法，并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人肝動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

小鼠內毒素(ET)ELISA 試劑盒

P Nixonn Ron (Prednisolone) ELISA Kit 人龍(Prednisolone)檢測試劑盒

Human26Sproteasome,26SPSMELISAKit 人26S蛋白酶體(26SPSM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAbnormalprothrombin,APT檢測試劑盒人異常原(APT)檢測試劑盒規格：96T/48T

正常女性人體肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISAKit小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)檢測試劑盒規格：96T/48T

EGFR重組小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

半乳糖凝集素9(GAL9)重組蛋白 Recombinant Galectin 9 (GAL9)

LYZL2重組人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 Protein

CDON Protein Human 重組人 CDON / CDO 蛋白

IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白

Alpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原 0.5mgAlpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原)

CDON Protein Human 重組人 CDON / CDO 蛋白

LYPD3重組小鼠 C4.4A / LYPD3 蛋白 Protein

ENPEP Protein Rat 重組大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (aa 41-945, His 標簽)

NLK重組人 nemo-like kinase / NLK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠B6(VB6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)檢測試劑盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/EBPβELISAKit 人CCAAT增強子結合蛋白β(C/EBPβ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenLipopolysaccharides,LPS檢測試劑盒雞脂多糖/內毒素(LPS)檢測試劑盒規格：96T/48T

載玻片細胞MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃腸癌標志物CA199檢測試劑盒規格：96T/48T

人肝動脈內皮細胞小鼠細胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

小鼠細胞凋亡因子配體 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

小鼠粒細胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D