實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人腎小球內皮分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細胞質豐富，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側，與血流直接接觸，是腎小球濾過膜的道屏障，可粘附細菌和白細胞，修復基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養的腎小球內皮細胞在免疫學和病理生理學領域中具有重要的研究價值。

方法簡介：

公司實驗室分離的人腎小球內皮采用先機械研磨過不銹鋼網篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人腎小球內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

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豚鼠卵清蛋白特異性IgE試劑盒   豚鼠卵清蛋白特異性IgE試劑盒   規格型號：96T/48T   豚鼠卵清蛋白特異性IgE試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：豚鼠卵清蛋白特異性IgE試劑盒、豚鼠卵清蛋白特異性IgEeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

豚鼠降鈣素基因相關肽試劑盒   豚鼠降鈣素基因相關肽試劑盒   規格型號：96T/48T   豚鼠降鈣素基因相關肽試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：豚鼠降鈣素基因相關肽試劑盒、豚鼠降鈣素基因相關肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human carbonic anhydrase 2 (CA-2) ELISA Kit 人酶2(CA-2)試劑盒

HumanoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2試劑盒人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒規格：96T/48T

植物中性蔗糖轉化酶(neualinvease)活性比色法定量試劑盒(胞質)20次

Humaenascin-R,TN-RELISAKit人肌腱蛋白R(TN-R)試劑盒規格：96T/48T

GPA33重組小鼠 GPA33 / Glycoprotein A33 蛋白 Protein

Annexin Ⅲ peptide 膜粘連蛋白A3抗體 0.5mgAnnexin Ⅲ peptide 膜粘連蛋白A3抗體

KDR重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

FLRT2 Protein Human 重組人 FLRT2 蛋白

C Protein Rat 重組大鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

白細胞激活黏附因子(ALCAM)重組蛋白 Recombinant Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)

FLRT2 Protein Human 重組人 FLRT2 蛋白

IFNA2重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IFNA2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白

PDGFRB重組人 PDGFRB / PDGFR-1 / CD140b 蛋白 Protein

人腎小球內皮細胞大鼠速激肽受體1(TACR1)試劑盒 ，英文名： TACR1 ELISA Kit

Mouse dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) ELISA Kit 小鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)試劑盒

ratProstaglandinE1,PG-E1Elisakit 大鼠前列腺素E1(PGE1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHIS(HumanHistamine)ELISAKIT人組胺

細胞ROS激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitColⅢ大鼠Ⅲ型膠原