細胞簡介：

兔成骨分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結，起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結構，構成面部的支架，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責骨基質的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區域，分泌酸性物質溶解礦物質，分泌蛋白酶消化骨基質，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細胞移行至被吸收部位，分泌骨基質，骨基質礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關鍵。成骨細胞培養不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統疾病的分子和細胞學基礎，也是藥物篩選、生物材料開發和生物工程研究的重要手段。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔成骨采用先用短時間消化、后用膠原酶反復消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的兔成骨經ALP染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3-5代左右；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

小鼠巨噬細胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)試劑盒   96T/48T

小鼠巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒   96T/48T

小鼠巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)試劑盒   96T/48T

小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒   96T/48T

小鼠卵巢癌標志物CA125ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucose oxidase (GOD) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶(GOD)試劑盒

HumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit 人cAMP反應元件結合蛋白(CREB)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanactivatedproteinCresistance,APCR試劑盒人活化蛋白C抵抗素(APCR)試劑盒規格：96T/48T

脂質過氧化物4-羥基壬烯酸(4-HNE)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒20次

MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit小鼠血管緊張素轉化酶(ACE)試劑盒規格：96T/48T

COLEC12重組大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

IFNL1重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

CXCL10 Protein Human 重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

OMG Protein Mouse 重組小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 標簽)

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

CXCL10 Protein Human 重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

COLEC12重組大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

OMG Protein Mouse 重組小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 標簽)

IFNL1重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

兔成骨細胞大鼠內皮素轉化酶1(ECE1)試劑盒 ，英文名： ECE1 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor soluble receptor alpha (PDGFsR- alpha) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)試劑盒

Ratthyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGlp-1ELISAKit大鼠胰高血糖素樣肽1

細胞脯(proline)含量比色法定量試劑盒20次

Ratsolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKit大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sAIL)試劑盒規格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。