細胞簡介：

兔肺動脈平滑肌分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結構細胞之一，在調控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。

方法簡介：

實驗室分離的兔肺動脈平滑肌采用 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔肺動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔肺動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

酸性酯酶染液   Eosinstain

中性酯酶染液   H-E dye

堿性酯酶染液   Wright'dye

雙重酯酶染液   Wright - Giemsa dye composite

豚鼠組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human gasic mucin (GM) ELISA Kit 人胃粘液素(GM)試劑盒

Humaotalprostatespecificaigen,tPSAELISAKit 人總前列腺特異抗原(tPSA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCreatineKinase,CK試劑盒人肌酸激酶(CK)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織DNA損傷彗星熒光試劑盒20次

Humanprostatespecificaigen,PSAELISAKit人前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL10RB重組小鼠 IL10RB / IL10R2 蛋白 Protein

EGF樣域蛋白7(EGFL7)重組蛋白 Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 Protein

IFNL3 Protein Human 重組人 IFNL3 / IL28B / Interleukin-28B 蛋白

IL6ST Protein Rat 重組大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白 (His & Fc 標簽)

EGF樣域蛋白7(EGFL7)重組蛋白 Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)

IFNL3 Protein Human 重組人 IFNL3 / IL28B / Interleukin-28B 蛋白

IL10RB重組小鼠 IL10RB / IL10R2 蛋白 Protein

IL6ST Protein Rat 重組大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白 (His & Fc 標簽)

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 Protein

兔肺動脈平滑肌細胞大鼠內凝集蛋白1(ITLN1)試劑盒 ，英文名： ITLN1 ELISA Kit

Monkey soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 猴可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒

RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit 大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGHRP-Ghrelin(Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin)ELISAKit小鼠生長激素釋放肽ghrelin

細胞含量比色法定量試劑盒20次

RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit大鼠S100B蛋白(S-100B)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。