細(xì)胞簡介：

兔嗅上皮分離自嗅上皮組織；嗅上皮細(xì)胞是鼻腔的嗅區(qū)黏膜的一種特殊的感覺性上皮細(xì)胞，嗅上皮細(xì)胞為棱形雙極細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞表面為細(xì)長的嗅毛，突出于嗅區(qū)黏膜上皮細(xì)胞表面，而細(xì)胞的另一端為中央突，常匯成多數(shù)細(xì)微的嗅絲，組成嗅神經(jīng)通向顱內(nèi)。這些細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)，是嗅覺功能的重要組成部分。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔嗅上皮采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔嗅上皮經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔嗅上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)檢測試劑盒 ，英文名： β-EPR ELISA Kit

Mice female three alcohol (E3) ELISA Kit 小鼠雌三醇(E3)檢測試劑盒

ELISA 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素3(mouse -3)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-12/P70ELISAKit大鼠白介素12

通用型馬鈴薯卷葉病毒(PotatoLeafrollVirus;PLRV)試劑20次

ELISAKitANG大鼠血管生長素

Western二抗稀釋液 100ml

TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor 0.5mgTSGF(Tumor Specific Growth Fanctor) 惡性特異性生長因子抗原

CDH2重組人 N-Cadherin / CD325 / CDH2D 蛋白 Protein

IL17A & IL17F Protein Human 重組人 IL17A & IL17F Heterodimer 蛋白

IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor 0.5mgTSGF(Tumor Specific Growth Fanctor) 惡性特異性生長因子抗原

IL17A & IL17F Protein Human 重組人 IL17A & IL17F Heterodimer 蛋白

Western二抗稀釋液 100ml

IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CDH2重組人 N-Cadherin / CD325 / CDH2D 蛋白 Protein

豚鼠神經(jīng)蛋白聚糖(NCAN)檢測試劑盒 ，英文名： NCAN ELISA Kit

Human low molecular weight heparin (LMWH) ELISA Kit 人低分子肝素(LMWH)檢測試劑盒

Rhesusmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/RhLAELISAKit 恒河猴主要組織相容性復(fù)合體(MHC/RhLA)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBK(HumanBradykinin)ELISAKit人血管舒緩

細(xì)菌尼羅紅染色試劑盒100次

Rabbitlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔嗅上皮細(xì)胞山羊免疫球蛋白G   英文名稱：   Immunoglobulin G   規(guī)格：      英文縮寫：   IgG

綿羊促卵泡生成激素   英文名稱：   Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   FSH

綿羊免疫球蛋白A   英文名稱：   Immunoglobulin A   規(guī)格：      英文縮寫：   IgA

綿羊免疫球蛋白G   英文名稱：   Immunoglobulin G   規(guī)格：      英文縮寫：   IgG

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。