實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔牙髓干分離自牙髓組織；牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi)。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似，牙冠部髓腔較大，稱髓室，牙根部髓腔較細小，稱根管，根尖部有小孔，稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經(jīng)、血管，淋巴和結(jié)締組織，還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細胞，其作用是造牙本質(zhì)。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機體抵抗力的差異，出現(xiàn)不同的病理變化，在臨床上會表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征。牙髓充血狀況持續(xù)時間較長后，轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥。間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)來源于胚胎時期的中胚層組織，具有很強的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞及肌細胞等多種終末細胞定向分化的能力，運用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細胞。

方法簡介：

實驗室分離的兔牙髓干采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔牙髓干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔牙髓干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠α半乳糖基抗原試劑盒   小鼠α半乳糖基抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠α半乳糖基抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α半乳糖基抗原試劑盒、小鼠α半乳糖基抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠αN已酰基葡糖苷酶試劑盒   小鼠αN已酰基葡糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αN已酰基葡糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αN已酰基葡糖苷酶試劑盒、小鼠αN已酰基葡糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒   小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒、小鼠αL巖藻糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒   小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒、小鼠αL艾杜糖苷酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白A(IgA)試劑盒

humanProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit 人前列腺素E1(PGE1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-parotidductaibody試劑盒人抗腮腺管抗體(ai-parotidductAb)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細胞壁束縛酸性蔗糖轉(zhuǎn)化酶(acidinvease)活性比色法定量試劑盒(胞壁)20次

Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains1,Tie1ELISAKit人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶1(Tie1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein

Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)

CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)

Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein

REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)

CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein

兔牙髓干細胞大鼠肌原纖蛋白1(FBN1)試劑盒 ，英文名： FBN1 ELISA Kit

Mouse histone deacetylase (HD) ELISA Kit 小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)試劑盒

RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFXELISAKit大鼠Ⅹ

細胞精(arginine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISAKit大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒規(guī)格：96T/48T