細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠背根神經(jīng)元分離自脊椎背根神經(jīng)節(jié)；感覺(jué)神經(jīng)母細(xì)胞發(fā)出軸突，呈束狀，左右對(duì)稱(chēng)地從神經(jīng)管的背部進(jìn)入，此時(shí)的脊神經(jīng)節(jié)即改稱(chēng)為背根神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹(shù)突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱(chēng)為尼氏小體。樹(shù)突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動(dòng)，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經(jīng)節(jié)是周?chē)窠?jīng)的主要傳入神經(jīng)元，是感覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)的中繼站。背根神經(jīng)元細(xì)胞的獲取較為困難，需要在盡可能短的時(shí)間內(nèi)通過(guò)解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經(jīng)節(jié)組織。神經(jīng)組織體外培養(yǎng)方法是當(dāng)代神經(jīng)科學(xué)一項(xiàng)很有價(jià)值的研究手段，背根神經(jīng)節(jié)富含周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)感覺(jué)神經(jīng)元，已廣泛用于軸突的導(dǎo)向及再生、中樞及周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子作用及受體分布、神經(jīng)細(xì)胞衰老機(jī)制、基因治療、組織工程等神經(jīng)科學(xué)的研究。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠背根神經(jīng)元采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠背根神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠神經(jīng)B(NKB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NKB ELISA Kit

Mouse thrombin activatable fibrinolysis inhibitor / thrombin activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI)ELISA Kit 小鼠纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)檢測(cè)試劑盒

RatDesmin,DesELISAKit 大鼠結(jié)蛋白(Des)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHb-AGE(Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts)ELISAKit人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物

細(xì)胞半胱蛋白酶-4(CASPASE-4)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatVitaminD,VDELISAKit大鼠(VD)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FGF1重組食蟹猴 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

Lpin1 protein Lpin1 protein(抗原 0.5mgLpin1 protein Lpin1 protein(抗原)

FCGR2B重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

CPNE1 Protein Human 重組人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白

ACO2 Protein Mouse 重組小鼠 ACO2 / Aconitase 2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

Lpin1 protein Lpin1 protein(抗原 0.5mgLpin1 protein Lpin1 protein(抗原)

CPNE1 Protein Human 重組人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白

FGF1重組食蟹猴 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

ACO2 Protein Mouse 重組小鼠 ACO2 / Aconitase 2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

FCGR2B重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein

小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human focal adhesion kinase (FAK) ELISA Kit 人黏著斑激酶(FAK)檢測(cè)試劑盒

HumanPeptideYYELISAKit 人多肽YY(Peptide-YY)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigIerleukin6,IL-6檢測(cè)試劑盒豚鼠白介素6(IL-6)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒20次

MouseCalretinin,CRELISAKit小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞小鼠內(nèi)皮細(xì)胞合酶(mouse eNOS)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠雌二醇(mouse E2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠促卵泡素(mouse FSH)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠凋亡相關(guān)因子(mouse Fas)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。