細胞簡介：

小鼠肺血管平滑肌分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺血管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺血管平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關(guān)鍵因素，新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肺血管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠肺血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白5(FATP5)檢測試劑盒 ，英文名： FATP5 ELISA Kit

Mouse soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 小鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)檢測試劑盒

MouseIerferonγ,IFN-γELISAKit 小鼠γ干擾素(IFN-γ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1

B6高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCT大鼠降鈣素

ROBO4重組小鼠 ROBO4 蛋白 Protein

白介素5(IL5)重組蛋白 Recombinant Interleukin 5 (IL5)

GABARAPL2重組人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 Protein

CSF1 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白

CD4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD4 蛋白

白介素5(IL5)重組蛋白 Recombinant Interleukin 5 (IL5)

CSF1 Protein Human 重組人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白

ROBO4重組小鼠 ROBO4 蛋白 Protein

CD4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD4 蛋白

GABARAPL2重組人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 Protein

小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat maix metalloproteinase 7 (MMP-7) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)檢測試劑盒

Humanmacrophagestimulatingprotein,MSPELISAKit 人巨噬細胞刺激蛋白(MSP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HamsterCathepsinK,cath-K檢測試劑盒倉鼠組織蛋白酶K(cath-K)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒20次

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠肺血管平滑肌細胞小鼠0酸化蛋白激酶檢測試劑盒   小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒、小鼠0酸化蛋白激酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠抗核膜糖蛋白210抗體檢測試劑盒   小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒、小鼠抗核膜糖蛋白210抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶檢測試劑盒   小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒、小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白檢測試劑盒   小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白試劑盒、小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。